Monkeypox Virus Real Time PCR Kit
Бүтээгдэхүүний дэлгэрэнгүй мэдээлэл
Зорилготой ашиглах
Бодит цагийн ПГУ-ын системийг ашиглан хүний ийлдэс эсвэл гэмтлийн эксудатаас сармагчингийн вирүсийг илрүүлэхэд ашигладаг.
Туршилтын зарчим
Энэ бүтээгдэхүүн нь флюресцент датчик дээр суурилсан Taqman® бодит цагийн ПГУ-ын шинжилгээний систем юм.Тусгай праймер ба зондууд нь сармагчингийн вирусын F3L генийг илрүүлэхэд зориулагдсан.Хүний хадгалсан генд чиглэсэн дотоод хяналт нь хуурамч сөрөг үр дүнгээс зайлсхийхийн тулд дээж цуглуулах, дээжтэй харьцах, бодит цагийн ПГУ-ын үйл явцыг хянадаг.Энэхүү иж бүрдэл нь сармагчингийн вирүс илрүүлэхэд шаардлагатай материалууд болох нуклейн хүчлийг олшруулах фермент, UDG фермент, урвалын буфер, тусгай праймер, датчик зэргийг багтаасан бүрэн лиофилжүүлсэн систем юм.
Үндсэн агуулга
Өгөгдсөн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг хүснэгтэд жагсаасан болно.
| Бүрэлдэхүүн хэсгүүд | Багц | Орц |
| Monkeypox вирусЛиофильжүүлсэн урьдчилсан хольц | 8 туузан ПГУ-ын хоолой× 6 уут | Праймер, зонд, dNTP/dUTP холимог, Mg2+, Так ДНХ полимераз, UDG фермент |
| MPV эерэг хяналт | 400 мкл × 1 хоолой | Зорилтот генийг агуулсан ДНХ-ийн дараалал |
| MPV сөрөг хяналт | 400 мкл × 1 хоолой | Хүний генийн сегментийг агуулсан ДНХ-ийн дараалал |
| Уусах уусмал | 1 мл × 1 хоолой | Тогтворжуулагч |
| Тохирлын гэрчилгээ | 1 ширхэг | / |
Үйлдлийн урсгал
1. ДээжЦуглуулга:Үүний дагуу сорьцыг ариутгасан хоолойд цуглуулна
стандарт техникийн үзүүлэлтүүдтэй.
2. Урвалж бэлтгэх (урвалж бэлтгэх хэсэг)
Багцын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг гаргаж аваад тасалгааны температурт тэнцвэржүүлж зогсолтын горимд хэрэглэнэ.
3. Сорьц боловсруулах (Загвар боловсруулах талбай)
3.1 Нуклейн хүчлийн олборлолт
Вирусын ДНХ задлах иж бүрдэлд тавигдах шаардлага, журмын дагуу нуклейн хүчлийг гаргаж авахдаа 200 мкл шингэний дээж, эерэг ба сөрөг хяналтын дээж авахыг зөвлөж байна.
3.2 Лиофильжүүлсэн нунтаг уусгах ба загвар нэмэх
Дээжний тоогоор сармагчны цэцэг вирусын лиофилжсэн премикс бэлтгэнэ.Нэг дээжинд Лиофильжүүлсэн премикс нунтаг агуулсан нэг ПГУ шаардлагатай.Сөрөг хяналт ба эерэг хяналтыг хоёр дээж болгон авч үзэх хэрэгтэй.
(1) Лиофильжүүлсэн премикс агуулсан ПГУ-ын хоолой бүрт 15 мкл уусгах уусмал нэмж, дараа нь ПГУ-ын хоолой бүрт 5 мкл хандалсан дээж/Сөрөг хяналт/Эерэг хяналт нэмнэ.
(2) ПГУ-ын гуурсыг сайтар таглаж, лиофилжсэн нунтаг бүрэн уусч, холилдох хүртэл ПГУ-ын хуруу шилийг гараараа гүйлгэж, бага хурдтай центрифуг хийх замаар шингэнийг ПГУ-ын хоолойн ёроолд цуглуулна.
(3) Хэрэв илрүүлэхийн тулд нийтлэг бодит цагийн ПГУ-ын багаж ашиглаж байгаа бол ПГУ-ын хоолойг олшруулах хэсэгт шууд шилжүүлнэ;Хэрэв илрүүлэхийн тулд BTK-8 ашиглаж байгаа бол дараах үйлдлүүдийг хийх шаардлагатай: ПГУ-ын хоолойноос 10 мкл шингэнийг BTK-8-ийн урвалын чипийн худаг руу шилжүүлнэ.Нэг ПГУ-ын хоолой нь чип дээрх нэг нүхтэй тохирч байна.Пипеткийг шахах үед 90 градусын босоо байрлалтай эсэхийг шалгаарай.Аэрозолийн саадтай соруурын үзүүрийг худгийн төвд дунд зэргийн хүчээр байрлуулж, эхний араа руу ороход пипеткийг түлхэхийг зогсооно (бөмбөлөг үүсэхээс сэргийлнэ).Цооногийг дүүргэсний дараа бүх цооногийг хамрахын тулд урвалын чипний мембраныг гаргаж аваад чипийг олшруулалтыг илрүүлэх хэсэгт шилжүүлнэ.
4. ПГУ-ын олшруулалт (илрүүлэх талбай)
4.1 ПГУ-ын хоолой/реакцийн чипийг урвалын саванд хийж, урвалын худаг бүрийн нэрийг харгалзах дарааллаар тохируулна.
4.2 Флюресценцийг илрүүлэх тохиргоо: (1) Monkeypox вирус (FAM);(2) Дотоод хяналт (CY5).
4.3 Дараах дугуйн протоколыг ажиллуул
ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio протокол:
| Алхам | Температур | Цаг хугацаа | Цикл | |
| 1 | Урьдчилан денатураци | 95℃ | 2 мин | 1 |
| 2 | Денатураци | 95℃ | 10 с | 45 |
| Хатаах, сунгах, флюресценц авах | 60℃ | 30 с | ||
BTK-8 протокол:
| Алхам | Температур | Цаг хугацаа | Цикл | |
| 1 | Урьдчилан денатураци | 95℃ | 2 мин | 1 |
| 2 | Денатураци | 95℃ | 5 с | 45 |
| Хатаах, сунгах, флюресценц авах | 60℃ | 14 с | ||
5. Үр дүнгийн шинжилгээ (хэрэгслийн хэрэглэгчийн гарын авлагаас үзнэ үү)
Урвалын дараа үр дүн автоматаар хадгалагдах болно.Шинжилгээ хийхийн тулд "Шинжилгээ" дээр дарахад багаж нь үр дүнгийн баганад байгаа дээж бүрийн Ct утгыг автоматаар тайлбарлах болно.Хяналтын сөрөг ба эерэг үр дүн нь дараах "6. Чанарын хяналт"-тай тохирч байна.
6. Чанарын шалгалт
6.1 Сөрөг хяналт: FAM сувагт Ct эсвэл Ct>40 байхгүй, хэвийн олшруулалтын муруйтай CY5 сувагт Ct≤40.
6.2 Эерэг хяналт: хэвийн олшруулалтын муруйтай FAM сувагт Ct≤35, хэвийн олшруулалтын муруйтай CY5 сувагт Ct≤40.
6.3 Дээрх бүх шалгуурыг хангасан тохиолдолд үр дүн хүчинтэй байна.Үгүй бол үр дүн хүчингүй болно.
Үр дүнгийн тайлбар
Дараах үр дүн гарах боломжтой.
| FAM сувгийн Ct утга | CY5 сувгийн Ct утга | Тайлбар | |
| 1# | Ct эсвэл Ct>40 байхгүй | ≤40 | Monkeypox вирус сөрөг |
| 2# | ≤40 | Аливаа үр дүн | Monkeypox вирус эерэг |
| 3# | 40～45 | ≤40 | Дахин туршилт хийх;Хэрэв энэ нь 40~45 хэвээр байвал 1# гэж мэдээлнэ үү. |
| 4# | Ct эсвэл Ct>40 байхгүй | Ct эсвэл Ct>40 байхгүй | Хүчингүй |
ЖИЧ: Хэрэв буруу үр дүн гарвал дээжийг цуглуулж дахин шалгах шаардлагатай.
Захиалгын мэдээлэл
| Бүтээгдэхүүний нэр | Муур.Үгүй | Хэмжээ | Сорьц | Хадгалах хугацаа | Транс.& Сто.Температур. |
| Monkeypox Virus Real Time PCR Kit | B001P-01 | 48 тест/иж бүрдэл | Ийлдэс / гэмтлийн эксудат | 12 сар | -25～-15℃ |
